Дуплекс модифика

Теперь алкилирование происходило лишь по тем остаткам цистеина, которые несут ответственность за связывание ДНК. Измененный белок р50 подвергали трипсинолизу и анализировали продукты протеолитического расщепления способом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Определение аминокислотной последовательности этих 3-х пептидов способом Эдмана подтвердило, что метку 14С содержал конкретно аминокислотный остаток Cys Приобретенные в работах [50] и [] результаты подверждали данные PC А комплексов гомодимера р50 с участками узнавания в ДНК [94, 95], согласно которым, выявленные способом хим модификации белка остатки лизина и цистеина вправду задействованы в процессе связывания кВ-содержащих дуплексов.

Внедрение мутантных форм белка для определения аминокислотных остатков фактора транскрипции NF-кВ, принимающих роль в связывании ДНК и димеризации Для определения областей NF-кВ, вовлеченных в процессы димеризации и связывания ДНК, создателями работы [] были сконструированы химерные белки, представляющие собой комбинацию субъединиц р50 и RelA человека рис. Результаты работы [] проявили, что на способность химерных белков рис.

Способность химерных белков связываться с участком узнавания в ДНК определяли способом "торможения в геле". В итоге были выявлены аминокислотные последовательности р50 и рб5 субъединиц, определяющие специфика их связывания с участком узнавания в ДНК. Предпосылкой, возможно, послужили конформационные перестройки, сопровождающие проведенные аминокислотные подмены. Таковой белок, в отличие от начального, был спсобен образовывать комплексы с участками узнавания RelA.

Приобретенный итог выявил определяющую роль аминокислотного остатка His64 р50 в обеспечении специфики связывания р50 с определенными кВ-участками. Ранее способность тиоловых групп цистеина просто алкилироваться под действием йодацетамида была применены в работе [] для получения ковалентной связи меж подходящим производным олигонуклеотида и цистеинсодержащим пептидом. Йодацетамидная группировка вводилась на 5 -конец цепи ДНК в процессе ацетилирования йодацетангидридом аминогруппы в составе начального 5 -аминогексильного производного олигонуклеотида.

Принципиальной индивидуальностью реакции являлось проведение ее в слабощелочной среде рН 8,3. В качестве начальных соединений для направленного введения в состав углеводофосфатного остова ДНК йодацетамидных группировок мы употребляли синтетические олигонуклеотиды, содержащие единичные 2 -амино-2 -дезоксиуридиновые звенья схема 2. Внедрение таковых олигонуклеотидов-«предшественников» дает возможность получать ДНК-дуплексы, реакционноспособная группировка в которых пространственно сближена с определенным остатком цистеина в ДНК-белковом комплексе.

Не считая того, в критериях проведения реакции ацилирования водно-органическая среда, рН 8,3 [] 2 -аминогруппа находится в значимой степени в активной непротонированной форме рКа 6,2 [] , а экзоциклические аминогруппы гетероциклических оснований не подвергаются модификации. Измененный ДНК-дуплекс , не содержащий кВ-участка, служил нехорошим контролем связывания. 1-ое число в номере ДНК-дуплекса показывает на длину олигонуклеотидной цепи, содержащей химически активную группу, 2-ое - на тип используемого ДНК-лиганда см.

Предложенный нами вид нумерации всепригоден и будет в предстоящем использован для обозначения остальных ДНК-лигандов. Выбор мест введения 2 -дезокси-2 -йодацетамидоуридиновых звеньев в состав ДНК базировался на построенных ранее схемах взаимодействия гомодимера р50 субъединицы NF-кВ С участками узнавания различной первичной структуры рис.

Синтез и характеристики олигонуклеотидов с единичной 2 -йодацетамидной группировкой В качестве начальных соединений для синтеза измененной цепи 2 -йодацетамидсодержащих ДНК-лигандов были применены надлежащие синтетические олигонуклеотиды с единичными 2 -амино-2 -дезоксиуридииовыми звеньями nU, любезно предоставленые научным сотрудником Хим факультета МГУ к.

Зубиным: В итоге реакции образовывалось соединение, владеющее наименьшей подвижностью в геле, чем начальный олигонуклеотид и его йодацетильное производное, и, по-видимому, представляющее собой конъюгат глутатиона и измененного олигонуклеотида рис.

Образование конъюгата происходит с количественным выходом и может служить подтверждением высочайшей реакционной возможности йодацетилировапных производных ДНК в реакции с цистеинсодержащими пептидами и белками. В связи с сиим, ДНК-лиганды типа I, используемые для аффинной модификации белка р50, получали конкретно перед их внедрением методом гибридизации йодацетилировапных олигонуклеотидов с комплементарными матрицами в буфере А рН 7,5 при комнатной температуре в течение 1 ч.

Комплексообразование и ко валентное связывание 2 - йодацетамидсодержащих ДНК-лигандов с гомодимером р50 субъединицы NF-KB Способность 2 -йодацетамидсодержащих ДНК-лигандов образовывать специальные комплексы с гомодимером р50 субъединицы NF-KB изучалась способом «торможения в геле». Сущность способа заключается в том, что в процессе гель-электрофореза в неденатурирующих критериях комплекс белка с радиоактивно меченой ДНК сохраняется по последней мере отчасти , и его подвижность в геле значительно меньше, чем подвижность ДНК.

Таковым образом нами было показано, что введение 2 -дезокси-2 -йодацетамидоуридинового звена в положения 5, 6 и 7 Ig-кВ - и И-кВ -участков значительно не влияет на способность ДНК-лигандов связываться с гомодимером р Следует отметить, что неспецифический ДНК-дуплекс , не содержащий кВ-участка, не взаимодействовал с белком рис.

Параллельно мы изучили возможность взаимодействия 2 -йодацетамидсодержащего дуплекса с разными цистеинсодержащими белками. Эти белки способны взаимодействовать с случайной последовательностью ДНК с образованием неспецифических комплексов [, , ]. Реакции ковалентного связывания проводили в соответственных буферах см. Как видно из рис. Формирование ковалентной связи меж 2 -йодацетамидсодержащей олигонуклеотидной цепью дуплекса и белком наблюдалось лишь в случае гомодимера р50 субъединицы NF-KB.

Совокупа приобретенных данных свидетельствует о том, что образование ковалентной связи ДНК-белок с ролью 2 -йодацетамидсодержащих ДНК-лигандов не лишь отлично, но и высокоспецифично. Введенные в 2 -положение углеводофосфатного остова ДНК, данные группировки реагируют с нуклеофильной группой пространственно сближенного аминокислотного остатка лишь в составе специфичного белково-нуклеинового комплекса.

При проведении реакций ковалентного присоединения ДНК-дуплексов, содержащих химически активные группировки, к белкам и пептидам, особенное внимание следует уделять дилемме селективности их связывания по отношению к определенным аминокислотным остаткам белка пептида.

Из литературных данных понятно, что йодацетамид в определенных критериях способен алкилировать не лишь тиоловые группы цистеина, но и нуклеофильные группы остатков метионина, гистидина, лизина и аспарагиновой кислоты [].

Данная способность зависит от рН реакционной консистенции и особенностей микроокружения модифицируемого аминокислотного остатка в составе пептида либо белка. Так, преимущественное алкилирование тиоловых групп цистеина наблюдается при проведении реакции в интервале значений рН от 7,5 до 8,5. Как проявили опыты, при синтезе фосфорилдисульфидньгх производных по способу «2» лучше активировать меркаптокомпонент: 5 -меркаптопроизводные наиболее склонны к окислению до 5 ,5 -дитиодимеров, чем олигонуклеотид-З -тиофосфаты до соответственных 3 ,3 -дифосфорилдисульфидов [].

Для получения 5 -дезокси-5 -меркаптопроизводных олигонуклеотидов в качестве начальных соединений были применены 5 -дезокси-5 -тритилтиопроизводные соответственных олигонуклеотидов. Тритильные группы удаляли 8,5 мМ веществом нитрата серебра согласно методике [] с некими модификациями. Реакции проводили при 0С. Следовательно, за протеканием реакции можно смотреть спектрофотометрически по количеству образующегося 2-тиопиридона. Реакция образования ФДГ в составе модельного олигонуклеотида по способу «2» проводилась при 25С.

В итоге для каждого значения рН буферной консистенции были получены отдельные кинетические кривые скопления 2-тиопиридона рис. Константу скорости реакции образования ФДГ в составе модельного олигонуклеотида кг вычисляли по формуле: где Со Х и Co Y - исходные концентрации З -тиофосфорилированного и 5 - 2-пиридилдисульфид содержащего компонентов олигонуклеотидной цепи, соответственно, С -концентрация 2-тиопиридона, выделившегося за время t.

Дальше были построены надлежащие графики зависимости от времени и по тангенсу угла наклона определены значения кг. Проведенные исследования проявили, что с уменьшением рН скорость реакции образования ФДГ в составе олигонуклеотида по способу «2» растет. Так, к примеру, при уменьшении рН от 7 до 4,5 константа скорости увеличивалась приблизительно в 60 раз.

Зная приблизительные значения констант диссоциации многофункциональных групп, участвующих в образовании ФДГ, а также на основании данных статьи [], мы представили, что механизм реакции образования ФДГ, по-видимому, подразумевает атаку моноаниона 3 -тиофосфорилированного компонента на монокатион 2-пиридилдисульфидного производного олигонуклеотида. Протонирование атома азота пиридинового цикла, возможно, наращивает электрофилыюсть атома серы, связанного с метиленовой группой олигонуклеотидного компонента и делает протонированный 2-тиопиридон наилучшей уходящей группой схема 2.

Скорость реакции в этих критериях оказалась так велика, что рост оптической плотности при выделении 2-тиопиридона не удавалось детектировать спектрофотометрически, кинетическая кривая сходу выходила на плато данные не показаны. Таковым образом, нами было установлено, что для получения ФДГ-содержащего олигонуклеотида по способу «2» не требуется наращивать время реакции, а довольно уменьшить рН реакционной консистенции либо добавить в раствор комплементарную матрицу.

Олигонуклеотиды, содержащие ФДГ, являются классом сравнимо новейших соединений, отличительная изюминка строения которых заключается в различной электрофильности атомов серы, входящих в состав дисульфидной группы. Предполагаемый Дополнительно нами были исследованы характеристики олигонуклеотидов, содержащих ФДГ, по отношению к действию таковых низкомолекулярных пуклеофилов, как Е-аминогруппа аминокислоты лизина и тиоловая группа цистеина табл. Приобретенные данные разрешают представить, что измененная группировка в составе ДНК-белкового комплекса будет в большей степени взаимодействовать с остатками цистеина белка, в то время как остатки лизина фактически не будут вступать в реакцию.

Данный пептид, содержащий остаток цистеина, количественно расщеплял дисульфидную связь ФДГ, как в составе одноцепочечного олигонуклеотида, так и в составе соответственного ДНК-дуплекса рис. Отметим, что в итоге атаки тиоловой группы глутатиона происходил не лишь разрыв ФДГ, но образование соединения, владеющего наименьшей подвижностью в геле, чем начальный 5 -дезокси-5 -меркаптокомпонент олигонуклеотидной цепи, и представляющего собой, по всей видимости, конъюгат пептида и данного компонента.

Синтезированный олигонуклеотидопептид владел той же подвижностью в геле, что и продукт реакции взаимодействия ФДГ-содержащего олигонуклеотида с глутатионом рис, 2. Таковым образом, показано, что атака тиоловой группы остатка цистеина пептида либо белка ориентирована на электрофильный атом серы ФДГ, связанный с метиленовой группой олигонуклеотида схема 2. Следовательно, для того, чтоб зафиксировать образование ковалентной связи меж ДНК-лигандом Ш-го типа стр.

Измененный дуплекс , содержащий в собственном составе лишь половину кВ-участка, предполагалось употреблять в качестве негативного контроля. Олигоиуклеотидные цепи, содержащие ФДГ, были синтезированы по способу «2» в буфере Г рН 4,5 в отсутствие комплементарной матрицы схема 2.

Следующее формирование химически активных ДНК-лигандов проводили в течение 1 ч при комнатной температуре, смешивая эквимолярные количества измененной цепи и комплементарной матрицы. При исследовании способом УФ-спектроскопии термической стойкости ФДГ-содержащих ДНК-лигандов, оказалось, что введение единичной pSS-группировки в состав немодифицированного -кВ -содержащего дуплекса 19N понижало его температуру «плавления» на С, то есть приводило только к незначимой дестабилизации.

Неспецифический ДНК-дуплекс Ш фактически не взаимодействовал с белками рис. Анализ взаимодействия доменов репликативного белка А человека с частичными ДНК-дуплексами способами ограниченного протеолитического расщепления и аффинной модификации Пестряков Павел Ефимович. Измененные ДНК-дуплексы с включениями тимидингликоля.

Фотосенсибилизированная модификация ДНК-полимераз в реконструированных ансамблях белков и в экстрактах клеток и ядер Лебедева Наталья Александровна. С5-цитозиновая ДНК-метилтрансфераза Ssoll как бифункциональный белок: исследование взаимодействия с участком метилирования и с промоторной областью генов системы рестрикции-модификации Ssoll Воробьева Ольга Валерьевна.

C5-цитозиновая ДНК-метилтрансфераза Ssoll как бифункциональный белок: исследование взаимодействия с участком метилирования и с промоторной областью генов системы рестрикции-модификации Ssoll Воробьева Ольга Валерьевна. Индивидуальности хим лигирования в ДНК-дуплексах необыкновенной пространственной структуры Федорова, Ольга Александровна. А Для вас нравится? ДНК-дуплексы, содержащие реакционноспособные группировки в углеводофосфатном остове, как реагенты для аффинной модификации остатков цистеина и лизина белков Романенков Андрей Сергеевич.

Содержание к диссертации Введение 1. Функционирование и роль NF-кВ В клеточке 10 1. Хим модификация ДНК 37 1. Хим модификация аминокислотных остатков фактора транскрипции NF-кВ 38 1. Внедрение способа аффинной модификации белка реакционноспособными аналогами ДНК для зондирования контактов фактора транскрипции NF-кВ с кВ-участком 47 2. ДНК-дуплексы, содержащие реакционноспособные группировки в углеводофосфатном остове, как реагенты для аффинной модификации остатков цистеина и лизина белков 53 2.

Внедрение ДНК-дуплексов, содержащих мелснуклеотидные фосфорилдисульфидпые группировки, для аффинной модификации белков 90 2. Синтез и характеристики фосфорилдисульфидсодержащих олигонуклеотидов 90 2. Аффинная модификация остатков лизина белков ДНК-дуплексами, содержащими реакционноспособные группировки вуглеводофосфатном остове 2.

Определение ДНК-белковых контактов в комплексах фактора транскрипции NF-кВ с ДНК способом рентгеноструктурного анализа В году разными создателями были размещены две работы по РСА комплексов гомодимера р50 субъединицы фактора транскрипции NF-кВ с олигонуклеотидными дуплексами, содержащими кВ-участок [94, 95]. Синтез и характеристики фосфорилдисульфидсодержащих олигонуклеотидов Как проявили опыты, при синтезе фосфорилдисульфидньгх производных по способу «2» лучше активировать меркаптокомпонент: 5 -меркаптопроизводные наиболее склонны к окислению до 5 ,5 -дитиодимеров, чем олигонуклеотид-З -тиофосфаты до соответственных 3 ,3 -дифосфорилдисульфидов [].

Похожие диссертации на ДНК-дуплексы, содержащие реакционноспособные группировки в углеводофосфатном остове, как реагенты для аффинной модификации остатков цистеина и лизина белков. Подробная информация. Каталог диссертаций. Служба поддержки.

Каталог диссертаций Рф. Англоязычные диссертации. Диссертации безвозмездно. Предстоящие защиты. Рецензии на автореферат. Отчисления создателям. Мой кабинет. Заказы: забрать, оплатить. Мой личный счет. Мой профиль. Мой авторский профиль. Подписки на рассылки. Для обычной работы веб-сайта нужно включить JavaScript. Похожие диссертации на ДНК-дуплексы, содержащие реакционноспособные группировки в углеводофосфатном остове, как реагенты для аффинной модификации остатков цистеина и лизина белков Анализ взаимодействия доменов репликативного белка А человека с частичными ДНК-дуплексами способами ограниченного протеолитического расщепления и аффинной модификации Пестряков Павел Ефимович Измененные ДНК-дуплексы с включениями тимидингликоля.

Правила оказания услуг Отчисления создателям Политика конфиденциальности и обработка индивидуальных данных. Cкачать диссертации и авторефераты безвозмездно Предстоящие защиты диссертаций. Математика Фармацевтика. Химия Биология. Свойства Интерфейс подключения. Электрические характеристики. Физические свойства. Условия эксплуатации. Свойства принтера. Свойства печати. Свойства расходных материалов. Фискальный накопитель.

Программное обеспечение. Отзывы 0 Вопросцы 0. Бросить отзыв. Ежели вы брали данный продукт, то мы будем благодарны за хоть какой отзыв. Задать вопросец. Ежели вы желаете выяснить доп информацию о товаре — задайте собственный вопросец. Служба поддержки Scanberry ответит на него в наиблежайшее время.

Москва, ул. Дорожная, д. Заказать звонок. Заказать обратный звонок. Ваше имя. Ваш телефон.

Посетила замечательная купить квартиру реалт бай пойман

Вас может проконсультировать наш менеджер, довольно выслать форму заявки ниже. Модель владеет рядом неповторимых параметров и черт, которые делают ее неповторимым предложением на рынке. Дуплекс Модифика это диван-кровать-трансформер, позволяющий из огромного комфортного дивана получить два всеполноценных спальных места, которые по удобству и качеству отдыха ничем не уступят стационарной двухъярусной кровати, но при этом значительно сберегут места в доме либо квартире добавив удобства и гибкости внутреннему месту.

Модель может быть исполнена в разных цветовых исполнениях, владея широким спектром, по раскраскам и фактурам тканевой части, что дозволит более органично вписать как в имеющийся, так и вновь создаваемый интерьер. Модель безупречна как для маленьких квартир и комнат, так и для просторных интерьеров. Ваше имя. Ваш телефон. Соберите свою модель в конструкторе При помощи конструктора вы можете выбрать все нужные характеристики для вашей мебели, подобрать цвета и материалы для производства, а также рассчитать стоимость.

Перейти в конструктор. Диванчик трансформер. Кровать с легкостью встраивается в шкаф, а на ее месте возникает письменный стол. Доступен в разных цветах ДСП и тканях дивана. Кровать преобразуется в шкаф глубиной всего 40 см, а вечерком раскладывается в огромную двуспальную кровать. Шкаф кровать — популярное решение для детской, спальни и гостиной.

Доступны разные цвета ДСП и фотопечать на фасадах. Двухъярусная кровать, интегрированная в шкаф непревзойденно экономит место, она практически незаметна в сложенном состоянии. Для сохранности использования 2-ой ярус оборудован раскладными бортиками. Может быть нанесение различных рисунков на фасады.

Малогабаритное спальное место, которое в сложенном состоянии занимает всего 40 см, но постоянно сумеет выручить, ежели пригодиться доборная кровать. Доступна в различных материалах ДСП и с фотопечатью на фасаде. Одним движением руки рабочий стол преобразуется в спальное место. При этом нет необходимости убирать вещи со стола. Можно заказать в разных цветах ДСП. Откидная двухспальная кровать — одна из самых фаворитных моделей трансформируемой мебели.

Возможна фотопечать на фасаде. Комфортное решение для детской комнаты, стол для занятий преобразуется в два спальных места. И все это на 2-ух квадратных метрах. Любые цвета ДСП и картинки фотопечати на фасадах на двухъярусном кровате-столе трансформере. Модель, где малогабаритная, схожая на неглубокий шкаф конструкция, трансформируется в двуспальную горизонтальную шкаф-кровать. В разложенном виде Фанк занимает около полутра метров метров.

Благодаря горизонтальному способу открывания эта модель удачно разместится даже в узенькой комнате. Нанесенная фотопечать на фасаде превращает эту модель в реальный арт-объект! Широкий диванчик трансформируется в двухъярусную кровать и в комнате прибавляется сходу два спальных места. Эта расчудесная мебель доступна в разных видах ткани, которую можно узреть в полном прайсе. Мы используем качественные и экологически незапятнанные материалы, которые сертифицированы и безобидны для малышей.

У нас фаворитные шкафы-кровати, мы даем гарантию 3 года на механизмы трансформации при правильной эксплуатации. Ежели у вас необычная комната, углы, выступы и обычная мебель для вас не подступает, мы сможем предложить изготовка мебели-трансформеров на заказ. Наши консультанты посодействуют выбрать пригодные эталоны и подобрать цвет, а саму мебель мы доставим к для вас домой.

Выберите в каталоге пригодный для вас шкаф кровать трансформер, закажите и через, 15 дней ваш набор будет готов к монтажу у вас дома. Доставка в Москве до квартиры — р. Доставка в регионы Рф по тарифу тр. Компания Незапятнанный Лист является производителем корпусной мебели и кроватей-трансформеров в Москве.

Мы предлагаем инноваторский подход к обустройству малеханьких квартир с внедрением Мебели Трансформеров! Откидная кровать выпускается нами уже 14 лет. Шкаф кровать трансформер — наша визитная карточка, так как в Москве по соотношению цены и свойства лучшего производителя не отыскать, ИКЕА далековато сзади.

Мы изготавливаем кровати, интегрированные в шкаф на заказ, по личным проектам. Большой опыт в изготовлении корпусной и трансформируемой мебели, разрешают нам быть фаворитами рынка и давать гарантии на свои работы. Часть проектов готовых шкафов-кроватей можно узреть в каталоге, но заказать вы сможете проект всех форм и дизайна. В этом огромное преимущество производства мебели на заказ. Не считая того, мы позаботились и о ваших эстетических предпочтениях.

Любая серия может быть выполнена в любом из множества цветов ДСП. Также можно украсить мебель фотопечатью из нашего каталога, зеркалами и ручками по собственному вкусу. Вообщем, ежели перспектива заниматься дизайном собственного интерьера вас не побуждает, это дело вы сможете доверить нашим консультантам в салонах продаж. Приобрести мебель можно по всей Рф, наше создание находится в Подмосковье.

Модульные диваны — одни из самых эргономичных видов мягенькой мебели. Независимо от стиля и обстановки помещения они делают атмосферу комфорта. Посиживать на их — одно удовольствие! Вы как будто утопаете в облаке из подушек, запамятывая о заботах и тревогах. У нас большой выбор мягенькой мебели, удовлетворяющей даже самые требовательные запросы. В нашем каталоге вы отыщите дизайнерские модели мебели, которые станут основным украшением комнаты.

Мы предлагаем мягенькие модульные диваны разных модификаций, размеров и цветов. Вы сможете выбрать:. Модульные диваны комфортны — их части можно компоновать так, как для вас охото конкретно сейчас. Их можно просто расширить, добавив доп элементы. Либо разбить на несколько секций, создав 2 либо наиболее диванов.

Также мы предлагаем варианты со спальным местом для тех, кто желает сохранить полезное место в доме и при этом непревзойденно высыпаться. Ежели готовые модели вас не устраивают, мы изготовим диваны на заказ. Обратитесь к менеджеру для согласования характеристик мягенькой мебели.

Модифика дуплекс купить дом в беларусь в деревне прудины

Какая фраза..., средняя стоимость квартиры в германии ясно

по пятницу 17,30 сотрудники сами Для дома. Благодарим за отклик сотрудники сами Для на эту даму. Женщина ничего не уже поступали жалобы на эту даму стоило всего то звоните только даром. Контактный номер 0-97-58-043-58Вакансия: уже поступали жалобы Ольга Горенко, 29.